本发明涉及一种判断尾巨桉胚性与非胚性愈伤组织的荧光定量PCR方法，属于植物愈伤组织质量鉴定的技术领域，具体包括定量PCR相关引物设计、尾巨桉愈伤组织总RNA的提取、愈伤组织RNA的反转录和荧光定量PCR三个步骤：设计7个定量分析的基因引物并由生物公司合成；使用TaKaRa公司的RNAisoPlus试剂盒提取不同类型愈伤组织总RNA；RNA样品用DNaseⅠ(Fermentas)消化，除去残余基因组DNA的污染；根据TOYOBOReverTraAce?qPCRRTKit使用方法进行cDNA第一链的合成，作为Real-timePCR反应的模板；荧光定量PCR采用SYBRGreenⅠ染料法，在BIO-RADReal-TimePCRSystem上进行，用OpticonMonitor3进行数据统计分析分上述基因在尾巨桉不同类型愈伤组织中表达量的差异，以确定尾巨桉胚性与非胚性愈伤组织；该方法准确可靠，操作简便，容易实施，实用性强。